Ce videoblog à partir de http://www.AoBBlog.com concerne l'un des travaux pratiques de biologie cellulaire et du développement que je dirige à l'Université de Leicester pour le cours # BS1003. Il s'agit d'infecter des tranches de racine de carotte avec trois souches de Agrobacterium, dont deux provoquent la division des cellules végétales. Une vidéo précédente a montré comment nous avons mis en place les cultures www.youtube.com/watch?v=mS6OjCekrNo ; ici, nous passons en revue les résultats et examinons les Agrobacterium structure du plasmide.

Le videoblog s'affiche mieux en HD 1080 si vous disposez d'une connexion Internet rapide ; le lien court est http://youtu.be/7V5Zdxsds5s.

Le développement des plantes peut être considérablement perturbé par certains agents pathogènes. Ici, nous avons vu comment l'agent pathogène bactérien, Agrobacterium tumefaciens, provoque des tumeurs sur des tissus végétaux différenciés en activant la division cellulaire. Le processus implique le transfert de gènes bactériens dans les chromosomes végétaux au niveau des plaies, entraînant la transformation génétique des cellules végétales qui se divisent ensuite de manière incontrôlée car elles ont incorporé les gènes de production d'hormones dans les cellules de la carotte. Ces gènes sont situés dans une molécule d'ADN circulaire présente dans le type sauvage Agrobacterium tumefaciens Connu sous le nom de T37, il s'agit du plasmide Ti, long d'environ 206 000 pb. La partie transférée dans l'ADN nucléaire de la carotte est appelée ADN-T et contient les gènes codant pour les hormones qui induisent la division des cellules végétales. Un autre groupe de gènes, codant à la fois pour des hormones et contrôlant le développement de la plante, est présent dans… Agrobacterium rhizogènes et celles-ci conduisent à la production de racines différenciées à partir des cellules de la carotte au niveau de la blessure – dans notre cas, la coupe – du tissu racinaire. La troisième souche de Agrobacterium tumefacienscelui que nous avons utilisé était similaire au type sauvage T37, mais les gènes de production d'hormones avaient été supprimés.

Introduction au livret pratique :
Prolifération cellulaire et organogenèse médiées par Agrobacterium
Introduction
Le développement des plantes et des animaux peut être perturbé par la maladie. Plantes et animaux peuvent souffrir de maladies oncogènes, caractérisées par une perte du contrôle normal de la division cellulaire et la formation de tumeurs. Chez les plantes, certaines espèces de bactéries du sol Agrobacterium provoquer des symptômes de maladie chez les plantes infectées qui se caractérisent par des tumeurs, la soi-disant maladie de la galle du collet (Agrobactérie tumefaciens) ou par la production aberrante de « racines poilues » (Agrobacterium rhizogènesLes symptômes de la maladie sont causés par le transfert, à partir de la bactérie, et l'expression dans le noyau de la plante, de gènes portés par une molécule d'ADN circulaire (un plasmide, le plasmide Ti, inducteur de tumeurs, ou le plasmide Ri, inducteur de développement racinaire), suite à l'excision et au transfert d'une partie de ce plasmide. Ce transfert de gènes de la bactérie à la plante représente une forme naturelle de génie génétique et a été exploité expérimentalement pour modifier la croissance, le développement et le métabolisme des plantes, à des fins de recherche fondamentale et appliquée.
Les tissus tumoraux végétaux se caractérisent par leur capacité à se développer sur des milieux dépourvus d’hormones, puisque les gènes transférés des bactéries aux cellules végétales codent des gènes qui favorisent la synthèse des auxines et des cytokinines.

Expérimental
Dans cette expérience, vous inoculerez des tissus végétaux (racines pivotantes de carottes) avec trois souches différentes de Agrobacteriumet étudier les effets sur les tissus infectés. Les explants seront conservés sur un milieu de culture minimal, sans ajout d'hormones. Par conséquent, tout cal ou autre excroissance des explants sera déterminé par l'effet transformant des bactéries.

LBA4404 [contrôle] = un « désarmé » A. tumefaciens souche (dépourvue de gènes de biosynthèse hormonale).
T37 = un type sauvage A. tumefaciens souche.
LBA9402 = un type sauvage A. rhizogènes souche.

RÉSUMÉ DES RÉSULTATS
Dans les carottes qui ont été utilisées comme témoin, sans infection par le Agrobacterium, il y a eu une quantité minimale de division cellulaire sur les cellules de surface et le tissu semble légèrement sec. Dans les carottes avec la soi-disant souche désarmée, LBA4404, il y a également eu une croissance et une division minimales des cellules. Les deux autres ont une division et une prolifération cellulaires étendues, dans le cas de Agrobacterium rhizogènes, se différenciant pour former des racines.

Dans l'une des conférences sur la biotechnologie, j'ai discuté un peu plus de la structure de l'ADN-T et un autre clip que je téléchargerai bientôt montrera des parties enregistrées en direct de cette conférence, résumant une partie du matériel discuté ci-dessus et dans cette vidéo.